获得性免疫缺陷综合征应该做哪些检查?
实验室检查:
1.血常规 常有红细胞,血红蛋白降低,呈轻度正色素、正细胞性贫血。白细胞常降至4.0×109/L以下。分类中性粒细胞增加,有核左移现象。少数表现为粒细胞减少。淋巴细胞明显减少,多<1.0×109/L 。有浆细胞样淋巴细胞和含空泡的单核细胞出现。血小板一般无变化,一旦有变化,血小板可明显减少。
使用Western蛋白印迹试验
本法是用含有去垢剂的缓冲液将感染的H9细胞溶解,经梯度超速离心提取可溶性病毒蛋白。病毒蛋白先沿纵轴方向在10%丙烯酰胺凝胶上用SDS —PAGE分离,再沿水平方向电泳移转并吸附于硝化纤维上,然后将该膜置于无免疫性蛋白溶液中(通常用牛血清白蛋白)。清洗后将待测血清和对照物培育,当血清HIV抗体阳性时,抗体结合到膜上的病毒蛋白上,最后用同位素标记的抗人IgG检测。如能检测出HIV蛋白抗原即为阳性,如仅P24阳性,则结果可疑,就对原标本重判。
2.免疫学检查 以细胞免疫系统变化为主,循环淋巴细胞显著下降,TH细胞减少,T细胞功能下降,CD4/CD8比例下降,正常人CD4/CD8之比为1.75~2.1,而获得性免疫缺陷综合征患者常<1.0。迟发型变态反应性皮试阴性。体外非特异性有丝分裂原刺激时,淋巴细胞转化降低。T细胞产生白细胞介素-2和干扰素γ减少。有不同程度的免疫球蛋白及免疫复合物升高。出现自身抗体,如产生RF、抗核抗体和抗淋巴细胞抗体等。多克隆性高球蛋白血症,对所搞原刺激不应生应有的抗体反应,自然杀伤细胞活性下降。
3.β2 -微球蛋白和新蝶呤(neopterin) 用放射免疫法(RIA)测定血清β2微球蛋白和新蝶呤。它们是被激活的巨噬细胞的产物,其血清水平的升高意味着免疫激活,具有与CD4 T细胞绝对计数、淋巴细胞百分率、CD4/CD8细胞比例下降同样的临床意义,即预示病情进展至获得性免疫缺陷综合征。
放射免疫法:本法是将感染的H9细胞和35S蛋氨酸孵育,用去垢剂将细胞溶解,再用抗IgGA蛋白琼脂糖去除有反应性的人抗原,将上清液(含有病毒蛋白)与待测血清混合,如有HIV抗体,则同位素标记的HIV蛋白与之结合产生沉淀。沉淀物用含有Cleland试剂的缓冲液和十二烷基硫酸(SDS)洗脱,即可将病毒抗原分离。然后病毒蛋白用放射显影鉴定,并同时用巳知的分子标记物比较,此法是目前最具有敏感性和特异性的检测HIV的方法。但费时多,技术难度大。
4.淋巴结活检 在获得性免疫缺陷综合征的高发地区及高危人群中,对腹股沟以外部位的淋巴结肿大,特别是持续性颈部淋巴结肿大的人普遍进行淋巴结活检是重要的措施,可见到淋巴结的反应性病变和肿瘤性病变等非特异的、但具有一定诊断价值的病理表现。有的获得性免疫缺陷综合征患者,表浅淋巴结消失,不易做活检。
5.其他 小便检查常有蛋白尿。血中肌酸酐和尿素氮可升高。
6.病原学检查:细胞培养,分离病毒,检测病毒抗原,检测毒核酸及检测逆转录酶,检测HIV抗体。
(1)HIV-1的病原学检查:
①HIV-1血清抗体的检测:测定血清抗体是目前确定有无HIV感染的最简便、快速而有效的方法。常用方法有酶联免疫吸附试验(ELISA):AIDS患者血清中的抗—HIV能与其抗原结合,清洗后加酶联抗人Ig,使其与抗—HIV结合,清洗后加入底物,产生有色反应即为阳性。还需用Western蛋白印迹法 (WB),免疫荧光法(IFA)或放射免疫沉淀试验(RIPA)进行复证。
纤维膜杂交试验特异性强,假阳性率极低。其诊断标准是:如ELISA连续两次阳性,且WB检测出现p24,gp41,gp120或gp160条带中任何两条条带阳性者,则可确认为HIV感染。如没有两条条带阳性者,则只能诊为“未定型”(indeterminate pattern)。这时可用聚合酶链反应(PCR)检测其特异的病毒核酸,或继续密切观察,反复作上述检测,以明确诊断。
②检测病毒抗原:由于抗体出现晚于抗原,因而不能早期诊断。如果在抗HIV-1阳转之前的窗口期筛选献血员,就会出现假阴性,后果是非常严重的。因此,筛选献血员比较好加测病毒抗原。通常检测P24,其灵敏性及特异性均较高。既有助于早期诊断,也可用于献血员筛选、药物疗效考核等。
③检测病毒核酸:在抗HIV-1阳转之前的窗口期,还可用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测HIV RNA。此法灵敏度更高,检测周期短,也有助于早期发现、献血员筛选、药物疗效考核等。但操作必须十分小心,防止污染,以避免假阳性。
④病毒分离和培养:从患者的淋巴细胞、血液、及其他体液中均可分离出病毒,阳性率较高,反复多次分离阳性率可达100%。分离的病毒可用CD4 T细胞培养。但方法复杂,成本较高,一般只用于实验室研究。
(2)HIV-2的病原学检查:血清学检查发现约80%的HIV- 1和HIV-2感染之间存在交叉反应。故用于检测HIV-1感染的ELISA和RIBA法难以确定HIV-2感染。特别是发生了HIV-l和HIV-2双重感染时,使诊断更为困难。在HIV-2流行区,可在检测HIV-1的基础上,先用HIV-2特异的ELISA药盒区别HIV-1和HIV-2感染,再用HIV-2特异的WB法作确认试验。在非流行区,当HIV-1试验阳性或弱阳性,而WB法不明确或阴性,或临床怀疑获得性免疫缺陷综合征,而HIV-1试验弱阳性、WB法阴性时,也要用HIV-2特异的ELISA药盒检测,以明确诊断。
近来为了节省时间和经费,大部分试剂盒厂家和血库采用HIV-1和HIV-2抗体联合测定。联合测定的ELISA模式与HIV-1抗体测定相同,不同的是在包被固相载体时用HIV-1和HIV-2二种抗原的混合物替代单一的HIV-1抗原。
临床检查:胸部及胃肠道X线检查,及早作出机会性感染和恶性肿瘤的诊断,对及时治疗和延长患者的生命是十分重要的。
1.胸部X线检查 常见的机会性感染有卡氏肺孢菌肺炎,恶性肿瘤有卡波齐(Kaposi)肉瘤。
2.消化道X线检查 胃肠道机会性感染主要的病原体是巨细胞病毒,恶性肿瘤仍以卡波齐肉瘤为常见。X线造影显示盲肠痉挛,黏膜皱襞不规则增厚及表浅的鹅口疮样溃疡,但应与溃疡性结肠炎和克罗恩病的X线表现相鉴别。上述X线表现均为非特异性的,应结合临床资料进行分析。必要时应配合内镜加活检以确诊。食管卡波齐肉瘤在X线片上显示食管中段呈多发性腔内息肉样病变。少数病变中央有钡剂积聚,显示“牛眼征”,在充气扩张的胃内还可见不规则增厚的黏膜皱襞。十二指肠卡波齐肉瘤为球部内黏膜下结节或轻度斑片状隆起。小肠卡波齐肉瘤为多发性结节伴中央溃疡。结肠卡波齐肉瘤以直肠最明显,表现为整个结肠黏膜下散在的结节状充盈缺损,直径几毫米至几厘米不等。较晚期患者结节融合和环形浸润肠壁,使直肠狭窄和僵直。